首页 考试吧论坛 Exam8视线 考试商城 网络课程 模拟考试 考友录 实用文档 求职招聘 论文下载
2012中考 | 2012高考 | 2012考研 | 考研培训 | 在职研 | 自学考试 | 成人高考 | 法律硕士 | MBA考试
MPA考试 | 中科院
四六级 | 职称英语 | 商务英语 | 公共英语 | 托福 | 托业 | 雅思 | 专四专八 | 口译笔译 | 博思
GRE GMAT | 新概念英语 | 成人英语三级 | 申硕英语 | 攻硕英语 | 职称日语 | 日语学习 |
零起点法语 | 零起点德语 | 零起点韩语
计算机等级考试 | 软件水平考试 | 职称计算机 | 微软认证 | 思科认证 | Oracle认证 | Linux认证
华为认证 | Java认证
公务员 | 报关员 | 银行从业资格 | 证券从业资格 | 期货从业资格 | 司法考试 | 法律顾问 | 导游资格
报检员 | 教师资格 | 社会工作者 | 外销员 | 国际商务师 | 跟单员 | 单证员 | 物流师 | 价格鉴证师
人力资源 | 管理咨询师 | 秘书资格 | 心理咨询师 | 出版专业资格 | 广告师职业水平 | 驾驶员
网络编辑 | 公共营养师 | 国际货运代理人 | 保险从业资格 | 电子商务师 | 普通话 | 企业培训师
营销师
卫生资格 | 执业医师 | 执业药师 | 执业护士
会计从业资格考试会计证) | 经济师 | 会计职称 | 注册会计师 | 审计师 | 注册税务师
注册资产评估师 | 高级会计师 | ACCA | 统计师 | 精算师 | 理财规划师 | 国际内审师
一级建造师 | 二级建造师 | 造价工程师 | 造价员 | 咨询工程师 | 监理工程师 | 安全工程师
质量工程师 | 物业管理师 | 招标师 | 结构工程师 | 建筑师 | 房地产估价师 | 土地估价师 | 岩土师
设备监理师 | 房地产经纪人 | 投资项目管理师 | 土地登记代理人 | 环境影响评价师 | 环保工程师
城市规划师 | 公路监理师 | 公路造价师 | 安全评价师 | 电气工程师 | 注册测绘师 | 注册计量师
化工工程师 | 材料员
缤纷校园 | 实用文档 | 英语学习 | 作文大全 | 求职招聘 | 论文下载 | 访谈 | 游戏
执业医师考试

2012年公卫助理医师考试辅导:多肽链的降解

  多肽链的氨基酸组成往往是比较复杂,因此直接分析多肽的氨基酸顺序还是很困难的,多采用将多肽链进一步降解成为更小的片段,然后再行分析。肽键的裂解是一级结构研究工作中的重要问题,它要求裂解点少,选择性强,而且反应产率高,目前主要有化学法和酶解法两类。

  1)化学法

  (1)溴化氰法 是最理想的化学方法,能选择性断裂甲硫氨酸所在的肽键

  溴化氢化学降解法其优点:

  ①一般蛋白质含甲硫氨酸较少,由此可获得大片段

  ②专一性强

  ③产率高达80%以上

  ④作用条件温和,在室温中用几到十几小时即可。

  (2)部分酸水解法

  Sanger在分析胰岛素的一级结构中采用了此法,即用0.1N盐酸在110℃或用6N盐酸在37℃水解。这种部分酸水解的方法特异性不强,因此对大片段的蛋白质和肽均不合适。

  (3)羟胺法

  这种方法近十年来开始受人注意,羟胺能专一性地裂解AsnGly的肽键,酸性条件下裂解Asn-Pro肽键。已用于某些蛋白质的分析。

  (4)N-溴代琥珀酰亚胺法

  主要裂解Try处的肽键,五十年代研究较多。但由于它也能断裂TyrHis肽键,因此应用不广。

  2)酶解法

  酶水解法较化学法具有更多的优越性,使用也更广泛。因其具有较高专一性,而且水解产率较高,所以可以选择各种不同专一性的酶进行专一性的断裂。

  常用的酶有胰蛋白酶、糜蛋白酶、胃蛋白酶和嗜热菌蛋白酶。

  胰蛋白酶专一断裂Lys,Arg的羧基侧肽键,如果对Lys,Arg,CysH进行化学修饰可改变胰蛋白酶的断裂性质。

  (1)赖氨酸的修饰。将Lys用顺丁烯二酸酐或甲基顺丁烯二酸杆修饰,则胰蛋白酶仅使Arg肽键断裂。

  顺丁烯衍生物在中性pH下稳定,胰蛋白酶水解仅使Arg键断裂。在酸性条件下顺丁烯衍生物可脱去封闭,此时再行胰蛋白酶水解,则得赖氨酸为末端的多肽。下述为蛋白质中的赖氨酸,经顺丁烯酰化作用后,被胰蛋白酶水解的例子。

  (2)精氨酸的修饰。精氨酸与1,2-和1,3-二羰化合物作用,缩合产物是一杂环化合物,十分稳定。然后胰酶水解仅断裂赖氨酸残基末端的肽键

  (3)半胱氨酸的修饰。若肽链内Lys、Arg均较少,则为了增加胰酶的裂解点,可以将半胱氨酸进行氨乙基化,其产物Sβ氨乙基半胱氨酸有类似Lys的结构,胰蛋白酶在水解时,不能识别这微细的变化,从而在半胱氨酸处断裂。

  蛋白水解酶的专一性

米源 主要作用点 其它作用点
胰蛋白酶 Arg,Lys
糜蛋白酶 Tyr,Phe,Trp Leu,Met,His,Asu,Gln
弹性蛋白酶 Leu,Ile,Ala 其它等
胃蛋白酶 胃粘膜 Tyr,Phe,Trp,Met,Len Ala,Glu,Asp,其它等
木瓜蛋白酶 Papayplant木瓜植物 Arg,Lys,Gly 其它等
嗜热菌蛋白酶 嗜热解蛋白芽孢杆菌 Leu,Ile,Phe Val,Tyr
枯草杆菌蛋白酶 枯草杆菌 芳香族及脂肪族残基

  肽链的裂解和重组大致有三种情况:一种是非特异性裂解,如酸水解。由于裂解的片段较小,造成分离的困难。因此这种非特异性裂解对大分子肽链是不适用的。第二种是特异性裂解,采用两种以上的专一裂解,然后进行组合,这种方法一般也适用于分子量小于5万的蛋白质。第三种是逐步的专一裂解,首先将某种氨基酸进行化学修饰,使水解酶专一断裂某一种氨基酸,分成若干片段,然后解除化学封闭,再用此酶裂解,使曾被封闭过的氨基酸断裂。目前倾向于采用这种裂解方式。

1 2  下一页
文章搜索
李瑞生老师
在线名师:李瑞生老师
   毕业于对外经济贸易大学,熟悉经贸类各种资格考试,培训、辅导过...[详细]
执业医师考试栏目导航
版权声明:如果执业医师考试网所转载内容不慎侵犯了您的权益,请与我们联系800@exam8.com,我们将会及时处理。如转载本执业医师考试网内容,请注明出处。