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第二十九单元 黄病毒

　　黄病毒属(Flavivirus)是一大群具有包膜的单正链RNA病毒。这类病毒通常通过吸血的节肢动物(蚊、蝉、白岭等)传播，故过去曾归类为虫媒病毒(arbovirus)。由于“虫媒病毒”一词在分类学中含义不够准确，所以现在已经不再使用。在我国，主要的黄病毒成员有乙型脑炎病毒、森林脑炎病毒和登革病毒。与黄病毒许多性状相似，亦通过节股动物传播，但基因组结构及复制方式不同的甲病毒属主要分布在美洲和非洲，重要的成员有东部马脑炎病毒、西部马脑炎病毒和委内瑞拉马脑炎病毒。以往认为，我国不存在甲病毒感染。近年研究发现新疆、云南、贵州等地区人群亦有不同程度的甲病毒属(辛德毕斯病毒、基孔肯雅病毒、东部马脑炎病毒)感染。

第一节　乙型脑炎病毒

　　流行性乙型脑炎(epidemic encephalitis B)是由嗜神经的乙脑病毒所致的中枢神经系统性传染病，简称乙脑。经蚊等吸血昆虫传播，流行于夏秋季，多发生于儿童，临床上以高热、意识障碍、惊厥、呼吸衰竭及脑膜刺激征为特征。部分患者留有严重后遗症，重症患者病死率较高。本病毒首先(1935年)在日本乙脑患者脑组织中分离获得，因此又称日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)，所致疾病在日本称日本乙型脑炎。1940年我国从脑炎死亡病人的脑组织中分离出乙脑病毒，证实本病的存在。除新疆、西藏、青海外，全国各地均有病例发生，年发病人数2.5万，病死率10%，大约15%的患者留有不同程度的后遗症。

　　一、生物学性状

　　(一)形态与结构

　　乙脑病毒属黄病毒科(Flaviviridae)，呈球形，有包膜的圆形病毒颗粒的直径约为40nm。核心含单股正链RNA，该病毒的完整基因组序列已被测定，全长约11kb，自5′至3′端依次编码结构蛋白C、M、E以及非结构蛋白NS1～NS5，病毒RNA在细胞浆内直接起mRNA作用，翻译出结构蛋白和非结构蛋白，在胞浆粗面内质网装配成熟，出芽释放。内有衣壳蛋白(C)与核酸构成的核心，外披以含脂质的包膜。在脂蛋白包膜表面有包膜糖蛋白(E)刺突，即病毒血凝素，能凝集鸡、鹅、羊等动物红细胞。抗原性稳定，但近年有报告以具有中和作用的单克隆抗体(McAb)检测15株国内的乙脑病毒时，可将其分为4个抗原组。人和动物感染本病毒后，均产生补体结合抗体，中和抗体和血凝抑制抗体。包膜内还有内膜蛋白(M)，参与病毒的装配。

　　(二)培养特征

　　小鼠和乳鼠是最常用的敏感动物，对皮下感染途径的易感性随鼠龄的增长而下降的，而脑内接种的易感性影响不大。乳鼠脑内接种乙脑病毒后3～4d发病，出现神经系统兴奋性增高、肢体痉挛、麻痹等症状，1周左右死亡。感染脑组织内含大量感染性病毒，制成10%悬液-20℃保存，可继续接种、传代，是分离病毒、大量制备抗原的可靠方法。

　　BHK-21 (幼仓鼠肾细胞)、白蚊伊蚊细胞(C6/36)、Vero等传代细胞以及金黄色地鼠肾细胞、猪肾细胞、鸡胚成纤维细胞等原代细胞是常用的敏感细胞，病毒在细胞内增殖引起细胞圆缩、颗粒增多、细胞脱落等CPE。在培养上清中含有传染性病毒，胞浆内胞膜上可检出特异性抗原。因细胞培养增殖病毒简便易行，已取代动物培养方法制备疫苗、诊断抗原，以及研究病毒复制机理、筛选抗病毒药物等。

　　(三)免疫原性

　　乙脑病毒抗原性稳定，在同一地区不同年代分离的毒株之间未发现明显的抗原变异。E糖蛋白上有中和抗原表位和血凝抗原表位，可诱发机体产生中和抗体和血凝抑制抗体，在感染与免疫中具有重要作用。用单克隆抗体做交叉血凝抑制试验证实，E糖蛋白上有与黄病毒属成员广泛交叉的属特异性抗原，也有仅与墨里山谷脑炎病毒(Murray Valley encephalitis virus)、西尼罗脑炎病毒(West Nile virus)、圣路易脑炎病毒(St. louis encephalitis virus)交叉的特异性抗原。不同特异性单克隆抗体已用于研究乙脑病毒抗原结构与功能，以及鉴定新分离的毒株，解决了常规免疫血清特异性低的问题。

　　乙脑病毒包膜糖蛋白具有血凝特性，能凝集鹅、鸽和新生雏鸡的红细胞，在pH6.2～6.4条件下凝集效价高。病毒血凝素与红细胞结合是不可逆的，但这种病毒与红细胞形成的复合物仍有感染性，加入特异性抗体可抑制这种血凝现象。

　　(四)抵抗力

　　乙脑病毒对热的抵抗力较弱，56℃30分钟或100℃2分钟即可灭活，故应在-70℃条件下保存毒株。若将感染病毒的脑组织加入50%甘油缓冲盐水中贮存在4℃，其病毒活力可维持数月。乙醚、1：1000去氧胆酸钠以及常用消毒剂均可灭活病毒。在酸性条件下不稳定，最适酸碱度为pH8.5～9.0。该病毒在外界环境中抵抗力不强。对低温和干燥的抵抗力很强，冷冻干燥后在4℃冰箱中可保存数年。

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