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试论HPLC测定覆盆子中金丝桃苷的含量

来源:考试吧(Exam8.com) 2013-01-07 9:48:00 要考试,上考试吧! 万题库

  【摘要】 目的 建立覆盆子中金丝桃苷的含量测定方法。方法 采用HPLC法。SinoChrom ODS BP色谱柱(5µm,4.6×250mm),流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液(15:85),检测波长:360nm。结果 金丝桃苷浓度线性范围0.00506~0.1012mg/ mL,r =0.99994;样品平均回收率为98.77%,RSD=1.57%(n=6)。结论 该方法简便、准确、重现性好,可用于该中药的含量测定。
【关键词】覆盆子 金丝桃苷 HPLC 药学
【Abstract】 Objective To establish a method to determine Hyperin in Rubi Fructus.Methods A HPLC method was used. Chromatographic assay was performed on a SinoChrom ODS BP(5µm,4.6×250mm)column.The mobile phrase consisted of acetonitile-0.1% phosphoric(15:85),the detection wavelength was set at 360nm.Results The linear range of Hyperin was from 0.00506 to 0.1012mg/ mL and correlation coefficient was 0.99994.The average recovery of Hyperin was 98.77% and RSD was 1.57 %(n=6).Conclusion The method is simple ,accurate and reproducible for the determination of Hyperin in Rubi Fructus.
【Key words】 Rubi Fructus Hyperin HPLC
覆盆子为蔷薇科植物华东覆盆子Rubus chingii Hu的干燥果实,有益肾固精缩尿、养肝明目的功效,用于治疗遗精滑精,遗尿尿频,阳痿早泄,目暗昏花。覆盆子果实中含有三萜类成分,覆盆子酸,鞣花酸,椴树苷,胡萝卜苷[1],另有文献报道,尚含黄酮化合物[2,3]。由于覆盆子基础研究薄弱,2010年版《中国药典(一部)》中仅有性状鉴别和显微鉴别。目前已有椴树苷的HPLC含测方法报道,但尚无覆盆子中的金丝桃苷定量测定的文献。本实验采用HPLC法对其进行了含量测定,结果表明,该方法快速简捷、重现性好,取得了满意的结果。
1 实验部分
1.1 仪器与试药
HP-Agilent1100型高效液相色谱仪,包括G1322A真空脱气机,G1311A四元泵,G1313A自动进样器,G1365A多波长检测器,LGC-1025M柱温箱,HP Rev.A.07.01色谱工作站;BP211D型1/10万电子分析天平(德国Sartorius公司);250超声波清洗器(上海)。
金丝桃苷对照品(供含测用,中国药品生物制品检定所提供,批号:111521-200303)。乙腈(色谱纯,美国Tedia公司),水为重蒸水,其余试剂均为分析纯。
覆盆子Rubi Fructus,经鉴定为蔷薇科植物华东覆盆子Rubus chingii Hu的干燥果实。
1.2 方法与结果
1.2.1 色谱条件与系统适用性考察
色谱柱:SinoChrom ODS BP(5µm,4.6×250mm);流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液(15:85);流速:1mL/min;检测波长:360nm;柱温:30℃;进样量:10µL;理论板数按金丝桃苷峰计算应不低于5000。

  1-金丝桃苷 1-Hyperin
图1 对照品(A)和样品(B)的色谱图
Fig.1 Chromatograms of reference substance(A)and sample(B)
1.2.2 对照品溶液的制备
精密称取金丝桃苷对照品10.12mg,置100mL量瓶中,加80%甲醇使溶解并定容至刻度,摇匀,作为对照品贮备液。精密吸取2mL,置10mL量瓶中,加80%甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。
1.2.3 供试品溶液的制备
取本品粉末(过四号筛)1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入80%甲醇50mL,密塞,称定重量,超声处理(功率250w,频率40kHz)1小时,放冷,再称定重量,加80%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
1.2.4 线性关系考察
精密吸取“1.2.2” 项制备的对照品贮备液0.5,1,2,3,5,10mL,置10mL量瓶中,加80%甲醇稀释至刻度,摇匀,分别吸取上述溶液10µL,按“1.2.1”项色谱条件测定,以进样浓度为横坐标(X:mg/mL),峰面积积分值为纵坐标(Y :mAU*s),进行线性回归,得回归方程:Y = 208.3 1X - 0.0134,r = 0.999 94。结果表明,金丝桃苷在0.00506~0.1012mg/mL的范围内呈良好线性关系。
1.2.5 精密度试验
精密吸取“1.2.2”项下制备的对照品溶液10µL,重复进样6次,测定峰面积,结果RSD=0.22%,表明本法精密度良好。

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